AUTORES: Humberto Tribulo 1, Paula Rodríguez Villamil1, Jose M. Oviedo 1, Felipe L. Ongaratto1, Rodrigo Cuervo 1, Reuben J. Mapletoft 2, Gabriel A. Bó 1. 1 Instituto de Reproducción Animal Córdoba (IRAC), Córdoba, Argentina. 2 Western College of Veterinary Medicine, University of Saskatchewan.
El Etilenglicol (EG) es el crioprotector más comúnmente utilizado en la transferencia de embriones bovinos comercial, debido a su rápida permeabilidad, lo que ha permitido la transferencia directa en el útero de las receptoras después del descongelamiento sin la necesidad de la remoción del crioprotector. Sin embargo, el EG ha sido utilizado por muchos años, siendo controversial aun su potencial de toxicidad sobre los embriones.
La mayoría de los protocolos usados por los profesionales, recalca la importancia de mantener la exposición de los embriones en el EG por un máximo de 5 a 10 minutos antes del congelamiento. Sin embargo, no hay reportes que confirmen los efectos tóxicos del EG, cuando los embriones son expuestos por periodos de tiempo mayores. Este experimento fue diseñado para evaluar el efecto de los diferentes periodos de exposición de 1.5 M de EG sobre la tasa de supervivencia de embriones bovinos producidos in vivo, antes del congelamiento. Los embriones producidos in vivo (n=667) utilizados, fueron colectados de donantes superovuladas, al día 7 posterior a la inseminación.
Todos los embriones usados fueron mórulas y blastocistos grado 1 según la clasificación de la IETS. Durante las 3 horas posteriores a la colecta, los embriones fueron seleccionados y distribuidos aleatoriamente en los diferentes grupos de tratamiento, para así ser expuestos en 1.5M de EG y 0.25 M sacarosa (Vigro EG Freeze with sucrose, Bioniche Animal Health, USA) y envasados en pajuelas plásticas de 0.25 mL a temperatura ambiente (22 to 25oC). Las pajuelas fueron selladas y colocadas en la congeladora Freeze Control CL 5500 (Cryologic Inc, Australia) a -6.5ºC, realizado el seeding y después de 10 min de equilibrio, congeladas a -0.6ºC/min hasta –35ºC, antes de ser sumergidas en el nitrógeno líquido.
Después de una semana de ser almacenadas dentro de nitrógeno líquido, los embriones fueron descongelados en baño de maría 30oC for 12 sec. Posteriormente, los embriones fueron cultivados a 38.8°C en medio de cultivo cubierto con aceite mineral en una atmosfera (5% CO2, 5% O2 y 90% N2) por 72 h, para determinar las tasas de re-expansión y de eclosión.
El experimento fue realizado en dos ensayos, en los cuales los embriones fueron expuestos por 5, 10 y 20 minutos (ensayo 1), ó 10, 20 y 30 min (ensayo 2). Las tasas de re-expansión y de eclosión fueron comparadas por l test de Chi-cuadrado.
En el ensayo 1, las tasas de re-expansión y de eclosión post-descongelado no presentaron diferencias (P<0.05), entre los grupos: 5 min (60/66, 91% y 41/66, 62%, respectivamente), 10 min (61/67, 91% y 41/67, 61%, respectivamente) y 20 min (57/67, 85% y 34/67, 51%, respectivamente).
En el ensayo 2, las tasas de re-expansión y de eclosión tampoco tuvieron diferencias (P<0.05) entre los grupos: 10 min (135/152, 89% y 105/152, 69%, respectivamente), 20 min (132/161, 82% y 107/161, 66%, respectivamente) y 30 min (126/154, 82% y 101/154, 66%, respectivamente).
En conclusión, los embriones bovinos producidos in vivo pueden ser expuesto de forma segura en el EG por periodos de exposición de hasta 30 min a temperatura ambiente, antes del congelamiento, sin afectar las tasas de supervivencia posterior al descongelamiento.
ICAR, julio de 2012, Canadá.
Trabajo realizado por miembros del IRAC y publicado en el ICAR, julio de 2012.
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